АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе

^ АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат.
Скорость прямой реакции максимальна при рН 9,0; оборотной – при рН 6-8. В организме равновесие сдвинуто в сторону оборотной реакции. Активность фермента увеличивается под воздействием ионов магния, марганца, кальция, глутатиона и цистеина АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе, а ионы цинка, меди и ртути, напротив, оказывают ингибирующее воздействие [16].

Креатинкиназа (типа КК-ВВ) из мозга цыпленка (Gallus gallus) состоит из 2-ух В-субъединиц (рис. 6): код 1qh4 (PDB-EBI). Полипептидная цепь АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе В-субъединицы креатинкиназы (типа КК-ВВ) из мозга цыпленка состоти из 380 аминокислотных остатков. Хотя эта последовательность отличается, но порядок аминокислотных остатков в калитическом центре этой В-субъединицы Arg132 - Arg320 - Glu232 - Arg292 - Arg236 стопроцентно совпадает с АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе такой для М-субъединицы креатинкиназы (типа ММ) из мускул человека код 1i0e (PDB-EBI).

Непременно «супрамолекулярным» является строение ассиметрического комплекса и на биологическом уровне активного октамера (рис. 7) митохондриальной креатинкиназы (КК АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе-мит.) из сердечной мускулы цыпленка (Gallus gallus): код 1crk (PDB-EBI). Полипептидная цепь субъединицы КК-мит. из сердечной мускулы цыпленка состоит из 380 аминокислотных остатков, как и для приведенной выше В-субъединицы типа АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе КК-ВВ из мозга цыпленка. Но порядок аминокислотных остатков в калитическом центре этой митохондриальной субъединицы Arg231(A) - Arg287(A) - Arg127(A) - Arg315(A) - Glu227(A) значительно отличается от приведенной выше В АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе-субъединицы креатинкиназы (типа КК-ВВ) из мозга цыпленка.

Необыкновенным является строение ассиметрического комплекса и на биологическом уровне активного димера креатинкиназы из сердечной мускулы зайчика (Oryctolagus cuniculus) (рис. 8). Полипептидная цепь субъединицы креатинкиназы АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе из сердечной мускулы зайчика состоит из 365 аминокислотных остатков. Как эта последовательность, так и порядок аминокислотных остатков в калитическом центре этой субъединицы Arg132 - Arg320 - Glu232 - Arg292 - Arg236 стопроцентно совпадает с такой для М-субъединицы креатинкиназы (типа АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе ММ) из мускул человека.






Набросок 6 – Схематическое изображение ассиметрического комплекса (слева) и на биологическом уровне активного димера (справа) креатинкиназы (типа КК-ВВ) из мозга цыпленка (Gallus gallus): код 1qh4 (PDB-EBI).








Набросок 7 – Схематическое АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе изображение ассиметрического комплекса (слева) и на биологическом уровне активного октамера (справа) митохондриальной креатин-киназы (типа КК-мит) из сердечной мускулы цыпленка: код 1crk (PDB-EBI).





Набросок 8 – Схематическое изображение ассиметрического комплекса (слева) и АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе на биологическом уровне активного димера (справа) креатинкиназы из сердечной мускулы зайчика (Oryctolagus cuniculus. Rabbit): код 2crk (PDB-EBI).


Одним из разъяснений этого парадокса может служить наличие снутри каждой группы изоферментов АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе нескольких изоформ, отличающихся по своим физико-химическим свойствам. Эти факты усложняют и делают воистину «супрамолекулярной» ставшую уже традиционной теорию о том, что «комбинация 2-ух субъединиц в димерную структуру приводит к образованию 3-х АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе изоферментов, именуемых по входящим в их состав субъединицам КК-ММ, КК-ВВ и КК-МВ изоэнзимами, и локализованных в скелетных мышцах, клеточках мозга и сердечной мышце, соответственно» [16]. Не считая того, в тканях миокарда АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе содержится и ММ-изофермент КК. В сыворотке крови здорового человека имеет место последующее соотношение изоферментов КК: активность КК-ММ составляет 94-96 %, КК-МВ - 4-6 %, изофермент КК-ВВ находится в следовых количествах.

Согласно современным представлениям, в АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе энергетическом обеспечении функции миофибрилл и саркоплазматического ретикулума сердечной мускулы ведущее место занимает креатинкиназный механизм, который в значимой мере определяет скорость и нрав внутриклеточного перераспределения энергии и утилизацию ее субклеточными структурами АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе. Потому активность креатинкиназы в сыворотке крови увеличивается при остром инфаркте миокарда. При всем этом активность креатинкиназы возрастает ранее, чем меняется активность других ферментов. Но существенное увеличение активности креатинкиназы в сыворотке крови может наблюдаться АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе также при повреждении скелетной мускулатуры и при самых разных нарушениях центральной нервной системы. Считается, что увеличение общей активности КК при ряде болезней центральной нервной системы связано с повышением проницаемости клеточных мембран скелетных мускул АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе и сердца, также снижением скорости инактивации и выделения фермента из кровотока. На основании всех узнаваемых данных можно прийти к выводу, что наибольшее распространение в медицинской лабораторной практике получило определение общей АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе КК и ее МВ-составляющей, при этом определение активности МВ-изофермента КК имеет особо принципиальное значение при диагностике инфаркта миокарда и мониторинге постинфарктного состояния.


Аспартатаминотрансфераза и аланинаминотрансфераза

Считается хорошим рассматривать вместе ферменты КФ АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе 2.6.1.1. либо аспартатаминотрансферазу (АСТ) и КФ 2.6.1.2. либо аланинамино-трансферазу (АЛТ), которые имеют много общего в строении и свойствах, также беря во внимание недочет детализированных структурных данных по АЛТ в отличие от АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе АСТ. Как АЛТ, так и АСТ состоят из 2-ух полипептидных субъединиц схожего типа с ММ порядка 45000, т.е. ММ каждого фермента составляет порядка 90000 [16]. Субъединицы имеют «богатую» вторичную структуру с 2-мя выраженными доменами АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе, один из которых нужен для связывания кофермента (пиридоксальфосфата). По последним данным, приобретенным способом рентгеновской дифракции кристаллов митохондриального фермента с разрешением 0,28 нм, считается, что оба активных центра димера находятся на границе меж субъединицами и состоят АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе из аминокислотных остатков обеих субъединиц. Для АСТ показано, что остаток Arg292 в обыкновенном ферменте в главном «отвечает» за специфика к субстрату. Мутантный по данному остатку фермент (подмена на Asp-292 приводит к инверсии АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе зарядового баланса) становится активным в реакции трансаминирования аргинина, а не аспартата [16].

АСТ из митохондрий сердечной мускулы цыпленка (gallus gallus): код 1map (PDB-EBI) состоит из 2-ух схожих субъединиц (рис. 9). Поли-пептидная АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе цепь субъединицы АСТ из митохондрий сердечной мускулы цыпленка состоит из 401 аминокислотного остатка. Считается, что кофермент ПФ всегда связывается с Lys258 (рис. 10) и порядок амино-кислотных остатков в каталитическом центре этой субъединицы АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе Trp140 - Asp222 - Lys258 довольно консервативен для всех АСТ. Всего в активном центре субъединицы АСТ насчитывается 19 аминокислотных остатков.

Нужно непременно учесть, что в этом активном центре находятся также еще 4 аминокислотных остатка из другой субъединицы АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе АСТ. Любопытно, что АСТ из цитоплазмы клеток сердечной мускулы цыпленка (gallus gallus): код 2cst (рис. 11) состоит из 2-ух схожих субъединиц, но состоящих из 411 аминокислотных остатков любая. Всего в активном центре субъединицы (обозначенной АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе А) этой АСТ насчитывается 19 аминокислотных остатков (с рядом различий) и еще 4 аминокислотных остатка из другой субъединицы (В) этой же АСТ. Принципиально, что порядок и положение аминокислотных остатков в каталитическом центре субъединицы этой АСТ неизменен АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе Trp140(A) - Asp222(A) - Lys258(A), невзирая на повышение (на 10 единиц) общего числа аминокислотных остатков для АСТ из цитоплазмы клеток сердечной мускулы цыпленка, по сопоставлению с АСТ из митохондрий АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе этой же мускулы.

АСТ катализирует обратимый перенос аминогруппы с аспарагиновой кислоты на α-кетоглутаровую кислоту с образованием оксалоацетата:



Наибольшее содержание АСТ найдено в сердечной мышце, в печени, скелетной мускулатуре, мозге, почках, семенниках. Так, активность АСТ АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе в сердечной мышце практически в 10000 раз выше, чем в сыворотке крови. Так как даже в эритроцитах активность АСТ в 10 раз выше, чем в сыворотке, то исследуемая сыворотка крови не обязана иметь следов АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе гемолиза. Повышение активности АСТ в сыворотке крови происходит при инфаркте миокарда (в 4-5 раз) и сохраняется 3-5 дней. Умеренное повышение активности АСТ находится также у нездоровых с метастазами в печень, циррозом печени АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе, при прогрессивной мышечной дистрофии, также при некрозе либо повреждении печеночных клеток хоть какой этиологии, включая холестатическую и обтурационную желтуху, острый и приобретенный гепатит, при этом в большинстве этих случаев уровень активности АЛТ выше уровня активности АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе АСТ [16].





Набросок 9 – Изображение одной субъединицы (слева) и димера (справа) АСТ из митохондрий сердечной мускулы цыпленка (gallus gallus): 1map (PDB-EBI).





Набросок 10 – Структура кофермента ПФ и субстрата (слева) и их локализация АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе (справа) в субъединице аспартатаминотрансферазы из митохондрий сердечной мускулы цыпленка (gallus gallus): код 1map (PDB-EBI)







Набросок 11 – Изображение димеров АСТ, приобретенных из цитоплазмы клеток сердечной мускулы цыпленка (gallus gallus): код 2cst (слева) и АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе свиньи (Sus scrofa): код 1ajs (справа)




Аланинаминотрансфераза катализирует обратимый перенос аминогрупп с L-аланина на α-кетоглутаровую кислоту с образованием пирувата и L-глутаминовой кислоты:

Более высочайшая активность АЛТ находится в печени, поджелудочной железе, сердечко АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе, и скелетной мускулатуре. Увеличение активности АЛТ является более специфическим признаком болезней печени, в особенности острых, что имеет огромное диагностическое значение. Обычно, оно появляется за 1-4 недели до развития клинических симптомов и за 7-10 дней АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе до обнаружения наибольшего уровня билирубина в крови, более чем в 5-10 раз превышая норму. Долгое повышение активности АЛТ либо увеличение активности в поздние сроки заболевания может означать начало громоздкого печеночного некроза АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе. Увеличение активности АЛТ в сыворотке крови отмечается при гепатитах различной этиологии, механической желтухе, циррозе печени, внедрении гепатотоксических препаратов, инфаркте миокарда. В норме соотношение активностей АСТ/АЛТ (коэффициент де Ритиса) для человека равно 1,33±0,42. У нездоровых АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе заразным гепатитом происходит понижение коэффициента, а при остром инфаркте миокарда резко увеличивается [16].


Гамма-глутамилтрансфераза

Фермент КФ. 2.3.2.2. либо γ-глутамилтрансфераза (ГГТ) – мембрано-связанный белок сложного строения: димер ГГТ состоит из субъединиц А и АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе В, содержащих различное число аминокислот (рис. 12). Таких димеров может быть несколько в «мембранно-трасферазном комплексе», который с полным основание можно считать «ферментной» СБС (рис. 12). К огорчению, детали структур ГГТ животных в АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе доступной литературе отсутствуют, потому тут приведены данные для микробов. Димер ГГТ, выделенный из микробов (Escherichia coli. Strain: k-12.), состоит из субъединиц, содержащих 359 (А) и 109 (В) аминокислотных остатков. Невзирая на то, что В-субъединица этой ГГТ АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе практически в 3,5 раза короче А-субъединицы, но в ней ведет взаимодействие с лигандом либо субстратом в 3 раза больше амино-кислотных остатков (15), чем в А-субъединице (6), что следует из строения АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе активного центра ГГТ (рис. 13).

ГГТ является главным из 6 ферментов γ-глутамильного цикла, служащего для переноса ряда аминокислот через плазматические мембраны. Данный фермент находится в больших концентрациях в печени, почках и поджелудочной железе. Его активность в АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе плазме является чувствительным индикатором болезней гепатобилиарной системы, хотя он и не дает способности разграничить холестатический и гепатоцеллюлярный типы патологии. При обструкции желчных путей повышение активности ГГТ в плазме может предшествовать АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе подъему активности щелочной фосфатазы. Активность ГГТ в плазме увеличивается при отсутствии болезней печени у пациентов, принимающих антиконвульсанты (аналогичное действие может оказывать рифампицин при лечении туберкулеза). В обозначенных выше случаях увеличение активности ГГТ в АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе плазме происходит не вследствие повреждения клеток, а в итоге усиления внутриклеточного синтеза фермента и освобождения его завышенного количества в циркуляцию в процессе обычного метаболизма клеток. Увеличение активности ГГТ плазмы связано также АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе с холестазом (превышение верхнего предела нормы более чем в 10 раз); гепатитом (острый и приобретенный); циррозом (без холестаза); панкреатитом (превышение верхнего предела нормы в 5-10 раз); многими состояниями, отражающими «вторичные воздействия» на печень: с лекарствами АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе, вызывающими индукцию фермента; с сердечной недостаточ-ностью (превышение верхнего предела нормы наименее чем в 5 раз) [16].






Набросок 12 – Изображение асимметрического комплекса – тетрамера (слева) и димера (справа) ГГТ, выделенной из микробов (^ Escherichia coli. Strain: k-12.): код 2dbw АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе (PDB-EBI)






Набросок 13 – Строение активного центра для субъединицы ГГТ из микробов (^ Escherichia coli. Strain: k-12.): код 2dbw (PDB-EBI)


Все эти ферменты и их изоформы в крови животных составляют соответствующий АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе набор – «ферментный профиль», который меняется при патологических конфигурациях тканей, что интенсивно употребляют в медицинской биохимической диагностике.


^ Липолитические ферменты (липазы из поджелудочной железы животных, микробов и грибов)

Разные типы липаз обычно относятся к липолитическим АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе ферментам (это сначала гидролазы эфиров карбоновых кислот) и играют важную роль в обмене липидов у животных [20–25]. Более принципиальной для данной работы являлась панкреатическая липаза либо триацилглицероллипаза (КФ 3.1.1.3) как гидролаза сложных эфиров глицерина АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе и жирных кислот либо, по-другому, ацилгидролаза разных триацилглицеридов. Панкреатическая липаза в большей степени вырабатывается поджелудочной железой животных и учавствует в расщеплении нейтральных жиров, поступающих в кишечный тракт с едой. Панкреатическая АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе липаза – один из интенсивно исследуемых липолитических ферментов, потому ее нередко употребляют в качестве модели для других липаз (как животного, так и растительного либо микробного происхождения).

Внедрение идеологии супрамолекулярных систем в особенности полезно АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе при структурно-функциональном исследовании комплексов молекул субстрата и димеров либо октамеров панкреатической липазы в комплексе с колипазой (рис. 14), выделенных из поджелудочной железы свиньи (Sus scrofa): код 1eth (PDB-EBI). На рис АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе. 15 и 16 приведены полипептидные последовательности для субъединиц липазы и колипазы свиньи (Sus scrofa), состоящих из 448 и 87 аминокислотных остатков, соответственно. Для правильного структурного представления этой довольно сложной супрамолекулярной системы нужно добавить 1071 молекулу воды, хотя АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе бы по одному катиону Са2+ и одной молекуле субстрата (рис. 17) на каждый комплекс липазы с колипазой в димере либо октамере (рис. 14 и 18). Строение каталитического центра липазы: Ser153, Asp80 и Gly77, отличается от «субстрат-связывающего» центра АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе. Подразумевается, что комплекс липазы с колипазой появляется 16 и 12 аминокислотными остатками соответственных белков с внедрением 8 водородных связей и от 96 до 100 «других контактов», хотя «критическими» для таковой супрамолекулярной организации организация этих комплексов являются АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе только 4 аминокислотных остатка с каждой стороны и 15 «других типов» контактов.

Гидролиз триглицеридов в желудочно-кишечном тракте животных осуществляется панкреатическими липазами, которые продуцируются у млекопитающих в ацинарных клеточках поджелудочной железы и АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе скапливаются в зимогенных гранулках, содержащих набор пищеварительных ферментов либо их проферментов. Из этих гранул липаза высвобождается в особый проток, по которому панкреатический сок поступает к месту собственного предназначения — в узкий кишечный тракт АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе. Данных, свидетельствующих о наличии профермента (зимогена) липазы, не имеется и нет никаких обстоятельств мыслить, что такой существует. В отличие от протеиназ либо фосфолипаз, панкреатическая липаза обладает особенной спецификой, которая состоит в том, что АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе липаза действует на собственный субстрат — триглицерид исключительно в том случае, если он находится в эмульгированном состоянии. Такое эмульгирование липидов отлично осуществляется желчью при участии солей желчных кислот (в печени синтезируются холевая, дезоксихолевая, гликохолевая АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе и таурохолевая кислоты), что наращивает скорость расщепления триглицеридов панкреатической липазой. Адсорбируясь и понижая поверхностное натяжение жировых капелек, желчные кислоты раздробляют их и превращают жиры и масла в узкую эмульсию, поперечник частиц которой не АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе превосходит 0,5 мкм. Эмульгирование жира приводит к повышению поверхности соприкосновения триглицерида с аква веществом липазы, т. е. упрощает ферментативный гидролиз [16, 24].







Набросок 14 – Схематическое изображение супрамолекулярных систем молекул субстрата и димера (слева) и АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе октамера (справа) комплексов липазы из поджелудочной железы свиньи (Sus scrofa) и колипазы : код 1eth (PDB-EBI)






Набросок 15 – Полипептидная последовательность для липазы из поджелудочной железы свиньи (Sus scrofa): код 1eth (PDB-EBI).





Набросок 16 – Полипептидная последовательность АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе для колипазы из поджелудочной железы свиньи (Sus scrofa): код 1eth (PDB-EBI).






Набросок 17 – Строение активного центра с включенным аналогом субстрата для липазы из поджелудочной железы свиньи (Sus scrofa): код 1eth (PDB-EBI АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе).
















Набросок 18 – Структура гидрофобного аналога субстрата (слева) и локализация 2-ух таких остатков (справа) в димере липазы из поджелудочной железы свиньи (Sus scrofa): код 1eth (PDB-EBI).


Панкреатическая липаза свиньи является гликопротеидом, имеющим молекулярную АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе массу порядка 50 000 и оптимум рН 8-9 [24]. Данный фермент расщепляет триглицериды, находящиеся в эмульгированном состоянии, но может гидролизовать также ди- и моноглицериды [24].







Обширно известны и интенсивно употребляются бактериальные липазы из разных АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе источников, к примеру, ^ Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas cepacia, Pseudomonas fluorescens [23–26]. В процессе исследования бактериальных липаз было найдено, что у их имеется два связывающих места: широкий кармашек для спирта и узенький – для карбоновых кислот АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе. Потому что липаза катализирует гидролиз триглицеридов, то два углеводородных остатка направляются в широкий кармашек, а другая ацильная группа – в узенький и длиннющий кармашек. Липаза из Pseudomonas может узнавать энантиомер вторичных спиртов благодаря специфичной АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе структуре широкого кармашка и демонстрировать при всем этом высшую энантиоселективность для вторичных спиртов, а липаза из Candida указывает низкую энантиоспецифичность для спиртов из-за плоской структуры широкого связывающего кармашка. После того как липаза подвергалась АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе импринтингу субстратами, происходило изменение структуры этого связывающего кармашка, вследствие чего изменялась энантиоселективность [26].

Плесневый гриб Мucor javanicus продуцирует ферменты с протеиназной и липазной активностью. Патентованы по последней мере два ферментных продукта из этого АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе плесневого гриба, созданных для использования в производстве сыров [24]. В этих неочищенных продуктах протеиназ найдена липолитическая активность, потому в сырах, созревающих при участии неочищенных протеиназ, скапливаются свободные жирные кислоты, которые АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе присваивают сыру специфичный вкус и которые при лишнем содержании могут вызвать ненужные конфигурации вкуса у сыра. Мельчайший организм выращивают на среде, содержащей 4 % пшеничных отрубей, при рН 6,7 и 35ºС. Из хим параметров фермента АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе приводятся только данные об ингибировании липолитической активности диизопропил-фторфосфатом. Цистеин, ЭДТА не оказывали влияние на активность. На этом основании фермент можно отнести к группе сериновых ферментов, но он отличается от большинства других липаз рН оптимумом АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе (около 5,5). В качестве субстратов этой липазы были испытаны несколько природных триглицеридов и моноглицеридов. Хотя липаза гидролизовала все эти соединения, наибольшая активность наблюдалась исключительно в отношении тридеканоина и триоктаноина. Метиловые эфиры АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе жирных кислот с недлинной цепью (4:0, 6:0 и 8:0) гидролизовались плохо, в то время как эфиры кислот с длинноватой цепью – отлично. О строении этой липазы и кинетике гидролиза ею субстратов доступная информация отсутствует.


^ Особенности функционирования липолитических ферментов

Согласно АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе основному постулату энзимологии, фермент и субстрат образуют комплекс, в каком протекает реакция и который потом распадается на начальный фермент и продукты реакции. Кинетические уравнения, выведенные на основании этого постулата, в целом АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе, применимы также к реакциям липолитических ферментов с их субстратами. Так, было показано, что гидролиз триглицеридов липазой поджелудочной железы подчиняется основному уравнению Михаэлиса-Ментен [15, 16, 24]. Но, это уравнение в случае липолитических реакций носит АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе достаточно формальный нрав, так как ферментативный гидролиз липидов – это гетерогенная реакция, происходящая на границе раздела фаз, так как фермент растворим в воде, а субстрат - нет. Как следует, фермент-субстратное взаимодействие должно также АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе протекать на поверхности раздела меж агрегированным субстратом и водой [15, 24]. К липолитическим ферментам относятся и внутриклеточные фосфолипазы, которые связаны с мембранами и не отличаются тут от других мембранных ферментных комплексов [27]. Но обычные липолитические ферменты АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе - липазы и фосфолипазы пищеварительных желез, ядовитых веществ, жировой ткани и крови - работают в специфичных критериях: субстрат фактически «неподвижен» по отношению к ферменту. Такое поведение субстрата обосновано его агрегацией в мицеллы. Во время липолиза АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе, разумеется, фермент должен отыскивать субстрат, а не напротив; в данном случае под «субстратом» предполагается не отдельная его молекула, а неводная фаза агрегированного липида (мицеллы) [24]. Все же, липолиз в среде и АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе биомембраннах имеют то общее, что их кинетика ограничивается 2-мя измерениями заместо 3-х и один из участников реакции (фермент либо субстрат) отчасти иммобилизован на границе раздела фаз (в «отдельной матрице»). Термин «суперсубстрат» был предложен АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе для обозначения матрицы, в которую встроена молекула субстрата [24]. В липолитических реакциях таковой матрицей может служить поверхность триглицеридной капли либо фосфолипидной мицеллы, тогда и она представляет собой агрегат многих молекул субстрата АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе. Матрица может быть поверхностью, измененной включением несубстратных участников реакций, таких, как амфифильные катионы либо анионы. Нужно, чтоб ферменты не только лишь передвигались к «суперсубстрату» и связывались с ним, но чтоб при всем этом АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе соблюдалась бы и верная ориентация активных центров поблизости молекул субстрата, находящихся в «суперсубстратной» фазе. Таким макаром, кинетика липолиза соответствует общим аспектам кинетики ферментативной реакции, но имеет также значительные отличия.

Скорость всех хим реакций находится АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе в зависимости от температуры, потому катализируемые ферментами реакции также чувствительны к изменениям температуры. Установлено, что скорость большинства биохимических реакций увеличивается в 2 раза при повышении температуры на 10 °С и, напротив АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе, понижается в 2 раза при снижении температуры на 10 °С [29]. Этот показатель получил заглавие температурного коэффициента. Но вследствие белковой природы фермента термическая денатурация при повышении температуры будет снижать эффективную концентрацию фермента с подходящим понижением АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе быстроты реакции. Так, при температуре, не превосходящей 45-50 °С, скорость ферментативной реакции возрастает согласно теории хим кинетики. При температуре выше 50 °С на быстроту реакции огромное воздействие начинает оказывать термическая денатурация белка-фермента, приводящая АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе к постепенному прекращению ферментативного процесса [16, 24].

Хорошей для деяния большинства ферментов теплокровных животных является температура порядка 36 - 40 °С; в этих критериях быстроту реакции оказывается наибольшей вследствие роста кинетической энергии реагирующих молекул. При больших температурах белковая глобула претерпевает АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе денатурацию и теряет свою активность. При низких температурах (0 °С и ниже) ферменты, обычно, не разрушаются, хотя активность их падает практически до нуля. Во всех случаях имеет значение время воздействия соответственной температуры. Необходимо АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе подчеркнуть, что на термолабильность ферментов определенное воздействие оказывает концентрация субстрата, рН среды и некие другие причины [16, 24].

Ферменты активны исключительно в определенном интервале рН. Многие аминокислоты, звенья белковых молекул, владеют многофункциональными АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе группами, способными к ионизации. Возможность роли данной группы в катализе находится в зависимости от ее ионного состояния. Лучший для катализа баланс протонированных и непротонированных групп определяет величину рН-оптимума данного фермента, который обычно лежит АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе в физиологическом интервале значений рН среды. Вид зависимости активности фермента от величины рН обскурантистской среды будет иметь вид колоколообразной зависимости, а значение рН, при котором достигается наибольшая активность фермента АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе, именуется рН-оптимумом ферментативной реакции.

Если ионизационные процессы не меняют константу связывания субстрата с ферментом, то величина константы Михаэлиса от рН зависеть не будет. Если же ионизация групп в активном центре фермента АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе переводит его в форму, не способную связывать субстрат, то независящей от величины рН становится константа каталитическая. На практике, естественно, картина обычно бывает еще более сложной, так как в состав активного центра могут заходить много ионизующихся АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе групп. Огромное значение имеет состояние ионизации субстратов и кофакторов, величина ионной силы среды. На скорость гидролиза липазой хоть какого избранного субстрата может влиять целый ряд разных соединений. В системе, применяемой для АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе определения липазы, нередко содержатся хлористый натрий и кальций, соли желчных кислот, другие белки и разные виды эмульгаторов [29].

Таким макаром, для каждого типа ферментов (из рассмотренных выше и многих других) внедрение идеологии супрамолекулярных ферментативных АТФ + Креатин  АДФ + Креатинфосфат - Отчет о научно-исследовательской работе систем позволяет как поглубже осознать их сложную структурную компанию, так и более правильно отразить реальные ситуации их функционирования в организмах животных и человека.



audit-effektivnosti-ispolzovaniya-personala.html
audit-forma-nezavisimogo-finansovogo-kontrolya.html
audit-i-reviziya-referat.html